Validación y Fiabilidad de Métodos Analíticos: Protocolo y Características Clave

Protocolo de Validación de Métodos Analíticos

Este documento debe incluir los siguientes elementos, siendo específico para cada producto y método, y firmado/fechado por los responsables de la validación y aprobación:

• Objetivo de la validación.
• Definición del sistema a validar.
• Identificación de los parámetros a estudiar.
• Diseño del plan experimental:
  • Muestreo.
  • Preparación de las muestras.
  • Equipos a utilizar.
• Criterios de aceptación.

Características de Fiabilidad de un Método Analítico

Selectividad y Especificidad

• Selectividad: Capacidad de un método analítico para medir y/o identificar simultánea o separadamente los analitos de interés, de forma inequívoca, en presencia de otras sustancias químicas que puedan estar presentes en la muestra.
• Especificidad: Capacidad de un método analítico para responder *solo* a una entidad química.

Linealidad y Rango

• Linealidad: Capacidad del método para proporcionar resultados directamente proporcionales a la concentración del analito en la muestra, dentro del rango establecido.
• Rango: Intervalo entre la concentración superior e inferior de analito para el cual se ha demostrado una correcta precisión, exactitud y linealidad del método.

Precisión y Exactitud

• Precisión: Grado de concordancia (dispersión) entre una serie de medidas de tomas múltiples a partir de una misma muestra homogénea, bajo las condiciones prescritas.
• Exactitud: Proximidad entre el valor aceptado convencionalmente como verdadero y el valor experimental encontrado.

Límites de Cuantificación y Detección

• Límite de cuantificación: Mínima cantidad de analito presente en la muestra que se puede cuantificar, bajo las condiciones experimentales descritas, con una adecuada precisión y exactitud.
• Límite de detección: Mínima cantidad de analito en la muestra que se puede detectar, aunque no necesariamente cuantificar, bajo dichas condiciones experimentales.

Procedimientos para la Determinación de la Linealidad

Se deben seguir los siguientes pasos:

• Estudiar al menos 5 niveles de concentración y analizarlos por triplicado.
• Realizar una evaluación estadística de la linealidad:
  • El coeficiente de determinación debe ser r² > 0.997.
  • El coeficiente de correlación debe ser r > 0.999.
• Aplicar un test de linealidad (procedimientos):
  • Coeficiente de variación de los factores de respuesta.
  • Significación estadística de la desviación estándar de la pendiente.
  • Análisis de la varianza (ANOVA).
• Realizar un test de proporcionalidad para evaluar si la recta pasa por el origen de coordenadas:
  • Prueba t de Student para demostrar que la ordenada en el origen es significativamente igual a cero.
  • Cálculo de los intervalos de confianza en los que debe estar incluido el cero.

Exactitud: Procedimientos y Ámbito de Aplicación

La exactitud se expresa como porcentaje de recuperación.

Ámbito de Aplicación

• Valoración en materia prima.
• Valoración en producto acabado.
• Cuantificación de impurezas.
• Estudios de velocidad de disolución.

Procedimientos de Determinación de la Exactitud

• Realizar un mínimo de 9 determinaciones sobre 3 niveles de concentración del analito.
• Riqueza de un principio activo: Método absoluto (valoración ácido-base).
• Determinación cuantitativa de un analito en un producto terminado: Método del placebo cargado.
• Determinación cuantitativa de impurezas: Método de adición de patrón.