Guía Completa sobre Ácidos Nucleicos: Estructura, Funciones y Técnicas de Estudio

Ácidos Nucleicos: Estructura, Funciones y Técnicas de Estudio

1. Definición de Ácidos Nucleicos

Son macromoléculas poliméricas encargadas de almacenar, transmitir y expresar la información genética de los seres vivos.

2. Unión de Nucleótidos

Los nucleótidos son unidades monoméricas constituidas por una base nitrogenada, una pentosa y una molécula de ácido fosfórico en forma de anión fosfato. Se unen entre sí mediante enlaces fosfodiéster.

3. Localización del ADN Procariota

Se localiza en los cromosomas, en una única molécula circular y bicatenaria. En menor proporción, se encuentra en los plásmidos, que son pequeñas moléculas circulares y bicatenarias.

4. Características de una Molécula de ADN

• Longitud: Depende de la cantidad de desoxirribonucleótidos.
• Composición: Proporción de cada desoxirribonucleótido.
• Secuencia de bases: Representada en dirección 5' -- 3'.

5. Proteínas Asociadas al ADN Eucariota

• Histonas: Con función estructural.
• No histonas: Con función estructural, enzimática y reguladora.

6. Descripción del ARNr

Es el más abundante en las células (aproximadamente el 80%). Combinado con proteínas, forma los ribosomas, donde tiene lugar la síntesis de proteínas. Se clasifica según su coeficiente de sedimentación: procariota y eucariota. Su estructura secundaria es muy compleja, presentando muchas regiones complementarias que forman horquillas y bucles.

7. Procesos para el Cumplimiento de las Funciones del ADN

• Replicación
• Transcripción
• Traducción

8. Características Generales de la Replicación del ADN

• Semiconservativa
• Comienza en un origen de replicación
• Bidireccional y secuencial
• Semidiscontinua

9. Actividades de una ADN Polimerasa con Actividad Exonucleasa

Eliminan nucleótidos uno a uno desde un extremo en dirección 5' -- 3', 3' -- 5' o en ambas.

10. Fragmentos de Okazaki

Son fragmentos que se forman durante la síntesis de la nueva hebra de ADN durante la replicación. Se generan porque, en cada horquilla de replicación, una hebra se sintetiza de forma discontinua (hebra retardada).

11. Inicio de la Transcripción del ADN a ARN

Se inicia cuando la ARN polimerasa reconoce un promotor (secuencia de ADN) y se une a él.

12. Fases de la Maduración del ARNm Eucariota

• Adición de una caperuza en 5'
• Adición de una cola de poli A en 3'
• Eliminación de los intrones

13. Elementos Necesarios para la Traducción del ARNm

• Una molécula de ARNm
• ARNt
• 20 aminoácidos
• Enzimas
• Ribosomas

14. Función de los Factores de Liberación en la Traducción del ARNm

Estos factores reconocen el codón de terminación en el ARNm y liberan la cadena polipeptídica.

15. Unión de Enzimas de Restricción de Corte Cohesivo en la Creación de Moléculas de ADN Recombinante

Los cortes cohesivos dan lugar a regiones monocatenarias que tienden a unirse con sus complementarias. Esto permite unir moléculas de ADN distintas que han sido cortadas con la misma enzima de restricción.

16. Clasificación del ADN Humano en Función de su Repetitividad

• Codificante (menor parte)
• No codificante (mayor parte)

17. Objetivos de la Extracción y Purificación de Ácidos Nucleicos

Poder trabajar con ADN y ARN. Para ello, hay que extraerlos del interior de las células, ya que se encuentran rodeados por una membrana, y purificarlos.

18. Objetivo del Pretratamiento de la Muestra en la Obtención de ADN Purificado

Consiste en hacer una suspensión celular, que es una suspensión formada por células libres y agregados que faltan liberar, en un medio acuoso.

19. Pretratamiento de una Muestra de Células de la Mucosa Oral

El pretratamiento consiste en centrifugar la muestra y eliminar el sobrenadante.

20. Componentes de la Solución de Lisis

• Detergentes (componente principal)
• EDTA
• Proteasas
• Agentes caotrópicos

21. Tratamiento Mecánico para Extraer el ADN en Células con Pared Celular

Es una homogeneización mecánica que consiste en fragmentar el tejido por abrasión o trituración para liberar las células que lo integran.

22. Fases de una Purificación de ADN con Solventes Orgánicos

• Eliminación de los compuestos solubles en solventes orgánicos
• Precipitación del ADN
• Lavado del ADN
• Resuspensión del ADN

23. Fundamento de la Técnica de Salting Out para la Purificación de ADN

Se basa en la precipitación de las proteínas a altas concentraciones de sales.

24. Purificación del ADN por Cromatografía de Adsorción

Se basa en la capacidad de adsorción de los ácidos nucleicos al vidrio y a la sílice en presencia de sales caotrópicas. Se utilizan columnas de adsorción de sílice.

25. Método de Elección para la Purificación del ADN Plasmídico

Lisis alcalina y neutralización rápida.

26. Inactivación de las ARNasas en una Solución de Lisis

Añadiendo isotiocianato de guanidinio, que es un potente inactivador de ARNasas.

27. Parámetros que Definen la Cantidad de un AN Purificado

• Integridad: Si el ácido nucleico sigue entero o se ha fragmentado.
• Pureza: Si se ha contaminado.
• Concentración: Cantidad de ácido nucleico.

28. Solución a una Contaminación por ARN

Añadiendo ARNasas, ya que el ARN es muy sensible a ellas.

29. Conservación de una Muestra de ARN

• Para periodos cortos: a -20°C
• Para periodos largos: a -80°C

30. Determinación del Grado de Pureza y Posible Contaminación de una Muestra de ADN

Absorbancia A320: 0,220 - 0,017 = 0,203 / 0,385 - 0,017 = 0,368 / 0,185 - 0,017 = 0,168

Cociente A260/A280: 0,385 / 0,185 = 2,08

Cociente A260/A230: 0,385 / 0,220 = 1,75

Nota: Se necesitan más datos para interpretar los resultados de las absorbancias y determinar el grado de pureza y posible contaminación de la muestra de ADN.