Factores que intervienen en la actividad enzimática
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Enzimas
® Las enzimas son agentes catalizadores de los sistemas Biológicos ® Todas las enzimas son proteínas excepto las ribozimas ® Son Altamente específicas y eficientes ® Muchas enzimas presentan regulación de su Actividad.
Sustrato
Molécula sobre la cual actúa una enzima.
El sustrato se une
Al sitio activo de la enzima, y se forma un complejo enzima-sustrato. El
Sustrato por acción de la enzima es transformado en producto y es liberado del
Sitio activo, quedando libre para recibir otro sustrato. La ecuación general es
La siguiente: E + S ⇌ ES → EP ⇌
E + P
Velocidad enzimática
Se determina en función de: ® La cantidad de desaparición de
Sustrato por unidad de tiempo ® La cantidad de producto formado por unidad de
Tiempo Además depende de la cantidad de enzima activa presente en la reacción.
Velocidad de la Reacción
Cuando la concentración de sustrato es saturante, la Totalidad de la enzima se encuentra formando el complejo enzima-sustrato y la Velocidad de la reacción es máxima y directamente proporcional a la Concentración total de enzima presente en el medio.
Determinación de Velocidades de reacción
® Sustratos y productos de la reacción enzimática ® Métodos Analíticos para su cuantificación ® El método fotométrico debe obedecer a la Ley de Lambert-Beer ® Curva de calibración para el método de medición.
Blanco sustrato
Este control contiene todos los componentes del ensayo Enzimático, excepto que el volumen de sustrato es reemplazado por un volumen Equivalente de amortiguador o agua.
Blanco enzima
Este control contiene todos los componentes del ensayo Enzimático, excepto que el volumen de enzima es reemplazado por un volumen Equivalente de amortiguador o agua.
Tiempo cero
Este control contiene Todos los componentes del ensayo enzimático, necesarios para la determinación De la actividad de la enzima pero, la reacción enzimática se detiene en el Momento mismo de completar la adición de los componentes del ensayo, agregando El agente inactivador inmediatamente después de completar la adición del último Componente de la mezcla de reacción.
Factores que Influencian la reacción enzimática
La velocidad de una reacción enzimática es influenciada por Múltiples factores que deben tenerse presente para la correcta medición de la Velocidad enzimática. § pH § Temperatura § Concentración de sustrato § Presencia de inhibidores.
pH
En los ensayos Enzimáticos el pH debe mantenerse constante durante la incubación (amortiguador) ya que la velocidad de una reacción enzimática está influenciada Por el pH del medio de incubación.
Temperatura
Modifica la velocidad De la reacción enzimática, por lo que debe mantenerse constante durante el Curso de la reacción, lo que se consigue fácilmente al realizar el ensayo en Baños termorregulados. A medida que la temperatura de incubación aumenta, la Actividad de la enzima aumenta, hasta alcanzar la denominada temperatura óptima Experimental. A temperaturas superiores, el proceso de desnaturalización se Hace cada vez más evidente, hasta producirse una total inactivación de la Enzima.
Unidades de la Expresión enzimática
Espectrofotometría
¨ La espectrofotometría es un método instrumental analítico, Que permite cuantificar y caracterizar un compuesto en solución. ¨ Se Fundamenta en la propiedad de los átomos y moléculas de ABSORBER Y EMITIR Energía dentro del espectro electromagnético.
Tipo de interacción Luz - materia
¨ Absorción:
La
Luz es absorbida por átomos, iónes ó moléculas, alcanzando un estado excitado
De mayor energía.
¨ Emisión
Liberación de un fotón por un átomo, ión ó molécula, alcanzando un estado de
Menor energía.
El proceso de Absorción
¨ La luz es absorbida por una sustancia sólo cuando la Energía corresponda a una necesidad energética ó de transición de la sustancia ¨ Los cambios a producirse en la sustancia pueden ser de carácter: n Electrónico n Vibracional n Rotacional
El proceso de Absorción
La Absorción DE Radiación por parte de un determinado Material o sustancia depende de la estructura composición química de las Moléculas y átomos que la componen.
Las estructuras químicas absorben radiación de longitudes de Onda determinadas.
Monocromador
Permite transformar la luz policromática (luz blanca) en luz Monocromática (una o un grupo muy reducido de longitudes de onda). ¤ Prisma ¤ Rejilla de difracción ¤ Filtro
Pasos para el Correcto uso del fotómetro
C B