Diagnóstico de Micobacterias: Técnicas de Cultivo, Tinción y Sensibilidad

Procesamiento de Muestras

Las muestras procesadas pueden ser de origen respiratorio (esputo, lavado bronquial) o no respiratorio (orina, heces, LCR, sangre, médula ósea, contenido gástrico).

Las muestras de sitios estériles (LCR, biopsias, líquido pleural, articulares) se inoculan directamente en el medio o se concentran para reducir su volumen. Las muestras de orina se centrifugan y se procesa el sedimento. Las muestras de heces se emulsionan y se dejan reposar para eliminar las partículas. Las muestras obtenidas con hisopos se transfieren a un caldo y se procesan como muestras de esputo. Las demás muestras se descontaminan, homogeneizan y concentran.

Transporte

Las muestras deben transportarse a 4ºC hasta 7 días, pero es preferible hacerlo lo antes posible.

Procesamiento

Los laboratorios procesan las muestras para eliminar o reducir las bacterias contaminantes que impiden el desarrollo de las micobacterias. Esto se realiza en tres pasos:

Descontaminación

Las muestras se descontaminan con ácidos y álcalis, siendo el hidróxido de sodio (NaOH) el más utilizado.

Homogeneización

Se fluidifica la muestra con N-acetilcisteína (mucolítico).

Concentración

Se centrifuga la muestra para favorecer la detección de bacilos en la tinción y el cultivo.

Cultivos e Identificación

Las micobacterias, excepto Mycobacterium leprae, pueden cultivarse en el laboratorio. Son exigentes nutricionalmente, por lo que se utilizan medios de cultivo no selectivos y enriquecidos (Lowenstein-Jensen), selectivos (Mycobatos) y diferenciales (PNB).

En los últimos tiempos, se han desarrollado medios de cultivo (bactec TB) con sustrato radiactivo que permite detectar el crecimiento de micobacterias.

Los cultivos se incuban a 35 ºC en oscuridad con atmósfera húmeda que contenga 5-10% de CO₂ durante la primera semana. Posteriormente, se incuban en condiciones normales (37 ºC, sin oscuridad ni CO₂). La mayoría de las micobacterias tardan 3-6 semanas en crecer.

Técnica de Ziehl-Neelsen

Para la tinción de Ziehl-Neelsen, se extiende una muestra de esputo sobre un porta y se fija con calor. Se tiñe con fucsina básica y se decolora con ácido-alcohol. Las micobacterias se observan rosadas sobre un fondo azul.

Interpretación

• Baciloscopía negativa: No se observan bacilos ácido-alcohol resistentes en 200 campos.
• Baciloscopía positiva +: Se observan menos de un bacilo por campo en 200 campos.
• Baciloscopía positiva ++: Se observan 1 a 10 bacilos por campo en 100 campos.
• Baciloscopía positiva +++: Se observan más de 10 bacilos por campo en 50 campos.

Baciloscopias Sospechas de Tuberculosis

La baciloscopia es fundamental para la investigación, diagnóstico y tratamiento de la tuberculosis. Informar sobre la presencia de bacilos ácido-alcohol resistentes no es diagnóstico confirmativo, pero permite sacar conclusiones.

Técnica de Fluorescencia Auramina Rodamina

Esta técnica se basa en la ácido-alcohol resistencia de las micobacterias, pero utiliza un fluorocromo y no requiere decoloración. Los bacilos se observan luminosos sobre un fondo oscuro.

Estudio de Sensibilidad a Antimicrobianos

Para el antibiograma de micobacterias se utiliza el medio Lowenstein-Jensen y técnicas específicas.

Prueba de la Tuberculina

Esta prueba estudia la hipersensibilidad a antígenos de M. tuberculosis. Se inyecta tuberculina intradérmicamente y se mide el diámetro de induración.

Pautas para Considerar el Test Positivo

• Diámetro de induración ≥ 10 mm en pacientes menores de 35 años
• Diámetro de induración ≥ 15 mm en pacientes de ≥ 35 años
• Diámetro de induración ≥ 15 mm en pacientes en contacto con pacientes tuberculosos o infectados con VIH

Patogenia de la Tuberculosis: Mycobacterium tuberculosis

• Accede a los alvéolos pulmonares por inhalación.
• Produce lesiones exudativas (inflamación aguda) o productivas (granuloma crónico).
• Puede diseminarse por la sangre a otros órganos (tuberculosis miliar).

Lesiones Pulmonares

Exudativa: Reacción inflamatoria aguda con edema y acumulación de leucocitos. Puede curar espontáneamente o evolucionar a necrosis tisular.

Productiva: Granuloma crónico con bacilos tuberculosos que se transforma en un tubérculo con tejido caseoso que acaba calcificándose.