Coloraciones topográficas
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COLORACIONES CITOPLASMATICAS:
Nos van a permitir el estudio de los núcleos además de las estructuras citoplasmáticas. No existen coloraciones selectivas para el citoplasma ya que las estructuras contenidas en él también quedan teñidas. A veces se añade una gota de ácido acético para favorecer el contraste de la imagen. Son coloraciones de fondo. Los colorantes más utilizados son: Eosina Eritrosina Naranja g y Fucsina ácida. Las carácterísticas que presentan este tipo de coloraciones son:
Eosina:
Pertenece al grupo de las fluoresceínas, es un ácido débil. Contiene 4 moléculas de bromo. La eritrosina contiene yodo. Se utiliza en solución acuosa al 1%, añadiendo una gota de ácido acético glacial por cada 100 ml de solución colorante. Tiñe el citoplasma, el tejido conjuntivo y las fibras de colágeno de rojo fuerte. Se debe diferenciar con abundante agua para que no penetre en el medio de montaje (glicerina).Naranja G:
Es un bue colorante del citoplasma, ácido y soluble en agua. Se utiliza en la coloración con azocarmín y en la de Mallory. El color naranja que toma el citoplasma se debe a la uníón con los aminoácidos tirosina y triptófano de las proteínas. Si se emplea con hemalumbre y eritrosina el tejido conjuntivo aparece teñido de color naranja.TINCIÓN DE SEMIFINOS:
Cuando se procesa material para microscopía electrónica es necesario, a veces, hacerse una idea de qué zona del tejido vamos a cortar. Téngase en cuenta que el área de una sección para observar con el microscopio electrónico es muy pequeña. Además, el proceso de osmificación que ha de llevarse a cabo previamente a la inclusión acarrea el oscurecimiento del tejido, con lo que dificulta aún más la orientación de la muestra.
Por ello es frecuente hacer secciones de 0.5 a 1 µm de grosor con el ultramicrotomo, para orientarnos en la muestra y seleccionar la zona a partir de la cual haremos las secciones ultrafinas. Los semifinos suelen tener áreas más más grandes que las que posteriormente vamos a usar para la obtención de las secciones ultrafinas. El colorante usado para teñir secciones semifinas es normalmente el azul de toluidina, el cual puede infiltrase en la resina calentada en un plancha y llegar hasta el tejido.Sección semifina de un glomérulo de un riñón obtenida a partir de una inclusión en resina y teñida con azul de toluidina.
CONTRASTE DE ULTRAFINOS:
El contraste no es estrictamente una tinción, puesto que no aporta color a la muestra, pero sí es un proceso para poder observar los componentes ultraestructurales de la célula, por ese motivo lo incluimos en este apartado. Aunque las secciones para microscopía electrónica se pueden observar directamente con el microscopio electrónico se suelen tratar previamente con metales pesados en un proceso denominado contraste, obteniendo así una imagen óptima de la ultraestructura celular. Téngase en cuenta que en la microscopía electrónica lo importante no es añadir sustancias coloreadas sino moléculas que puedan interferir con el camino de los electrones emitidos por el microscopio y que atraviesan la muestra. Los electrones que atraviesan la muestra inciden sobre una pantalla fosforescente que emitirá destellos de luz cuando reciban el impacto de un electrón y permite observar las carácterísticas del tejido. Los metales pesados unidos al tejido impedirán que pasen los electrones y por tanto se verá una zona negra en la pantalla fosforescente, mientras que en aquellas zonas de la célula donde no estén estos metales provocaran áreas luminosas en dicha pantalla. Por ello todas las imágenes originales de microscopía electrónica son en blanco y negro, aunque se puedan colorear posteriormente con un ordenador.