Microbiologia

Métodos empregados na observação de bactérias: Microscópio: ferramenta mais importante na observação de bactérias; Esfregaço: filme delgado de material contendo o microrganismo, é espalhado na superfície da lâmina; Fixação: mata os microrganismos e os fixa na lâmina; Coloração: corar os microrganismos com um corante que enfatiza certas estruturas; 1. Colorações Simples: Objetivo primário é destacar todo o microrganismo, para que a forma celular e as estruturas básicas fiquem visíveis; Exemplos de corantes simples: azul de metileno, carbolfuccina, violeta de genciana, safranina; Colorações Diferenciais: Os corantes diferenciais reagem de modo distinto com tipos diferentes de bactérias, podem ser usados para diferenciá-las. Corantes diferenciais mais usados: coloração de Gram e Álcool-ácido resistente. Coloração de Gram: Desenvolvida em 1884 pelo bacteriologista Hans Christian Gram Procedimento de coloração mais útil, pois classifica as bactérias em dois grande grupos: Gram-positivas e Gram-negativas.Regra geral: reação duvidosa ? G (+) Técnica mais consistente quando usada bactérias jovens, em crescimento. Diferenças na parede celular de G (+) e G (-): - G (+) tem uma camada mais espessa de peptideoglicana, que deixa mais resistente ao dano mecânico. G (-) tem mais lipídeos na parede celular. O tratamento com álcool/ éter acetona extrai os lipídeos, resultando numa permeabilidade aumentada (sai o azul violeta e retêm a fuccina). . Colorações Especiais: Os corantes especiais são usados para corar e isolar partes específicas dos microrganismos, como os endosporos e os flagelos, e para revelar a presença de cápsula. 3.1- Coloração Negativa para Cápsulas: Suspensão bacteriana é misturada com tinta nanquim ou nigrosina, para fornecer um fundo escuro e corar as bactérias com uma coloração simples ? safranina - Devido à sua composição química, as cápsulas não aceitam a maioria dos corantes biológicos como a safranina e, assim, aparecem como halos circundando cada célula bacteriana corada. O uso de tinta nanquim ilustra a técnica de coloração negativa, os corantes negativos não penetram a cápsula e, portanto, fornecem um contraste entre a cápsula e o meio escuro circundante. - Coloração para Endosporos: Os endosporos não podem ser corados pelos métodos comuns, pois os corantes não penetram na parede do endósporos; Técnica mais comumente usada ? Schaeffer-Fulton. O verde malaquita, coloração primária, é aplicado a um esfregaço fixado pelo calor e aquecido em vapor por cerca de 5 minutos. O calor auxilia a coloração a penetrar na parede do endósporo. A preparação é lavada com água por 30s, para remover o verde malaquita de todas as partes da célula, exceto dos endósporos. A safranina, um contacorante, é aplicado ao esfregaço para corar as porções da célula que não o endósporo; Os endosporos aparecem em verde dentro de células vermelhas ou rosadas. - Coloração dos Flagelos: Flagelos são estruturas pequenas para serem vistas ao microscópio óptico sem coloração; Técnica utiliza um mordente (iodo) e o corante fuccina (carbolfuccina) para aumentar os diâmetros dos flagelos até que eles se tornem visíveis no microscópio óptico; Utilizado o número e arranjo de flagelos como auxílio diagnóstico. Características Culturais: Exigências Nutritivas: Fonte de energia: Fototróficos: energia do sol; Quimiotróficos: oxidação de compostos químicos; Fonte de carbono: Autotróficos: dióxido de carbono; Heterotróficos: compostos orgânicos. Exigências Nutritivas: Fonte de energia X Fonte de carbono: Fotoautotróficos, Fotoheterotróficos, Quimioautotróficos, Quimioheterotróficos. Exigências Nutritivas: Fonte de nitrogênio: Nitrogênio atmosférico, compostos nitrogenados, natureza; Fonte de enxofre, fósforo, minerais e vitaminas: Natureza ou adicionados no meio de cultura; Água: Todos os nutrientes devem ser dissolvidos em água para poderem ser absorvidos. Condições Físicas: Temperatura: - Psicrófilas: crescem em baixas temperaturas, até inferior a 0°C. Ponto ótimo entre 15 e 20°C. - Mesófilas: em torno de 37°C. Ponto ótimo entre 25 e 45°C.- Termófilas: crescem em altas temperaturas, entre 45 e 60°C. Ponto ótimo entre50 e 60°C.; 2- pH: 6,5 - 7,5 Exigência atmosférica: Aeróbicas obrigatórias: crescem em presença de oxigênio. Anaeróbicas obrigatórias: crescem na ausência de oxigênio. Anaeróbicas facultativas: crescem na presença ou ausência de oxigênio. Microaerófilas: aeróbicas obrigatórias, mas crescem em baixas tensões de oxigênio (20%). Meios Bacteriológicos: Principais componentes dos meios de cultura: 1- Extrato de carne: carboidratos compostos orgânicos de N₂ vitaminas e sais 2- Peptona: promove o crescimento principal fonte de nitrogênio algumas vitaminas, carboidratos. Principais componentes dos meios de cultura: Ágar: solidificante Extrato de levedura: Fonte de vitamina B Compostos orgânicos de N2 e C. Tipos de meios de cultura: 1- Meios quimicamente definidos: composição química conhecida. 2- Meios Complexos: composição variada extrato de levedura, carne ou de plantas, peptonas. Tipos de meios de cultura: 3- Meios e metodologia para crescimento de anaeróbios: - meios redutores: Tioglicolato de sódio - Jarra de Gaspak. Tipos de meios de cultura: 4- Meio Seletivo: adição de certas substâncias químicas ao ágar nutritivo que previne o crescimento de um grupo de bactérias sem agir sobre outras. Ex: Verde brilhante (seletivo para G-: Salmonella), Sabouraund dextrose (crescimento de fungo), Ágar MacConkey (seletivo para G-). Tipos de meios de cultura: 5- Meio Diferencial: incorporação de certos reagentes ou substâncias químicas no meio resulta num tipo de crescimento ou modificação, que permite distinguir os tipos de bactérias. Ex: Ágar sangue: hemólise, Ágar MacConkey: lactoseTipos de meios de cultura:Meio de enriquecimento:utilizado para o isolamento de bactérias presentes em pequeno número junto com outras que estão em grande quantidade.Contém todos os nutrientes necessários para o crescimento e multiplicação da bactéria.Pode ser considerado um meio seletivo. Culturas puras e características culturais:1- Culturas: quando as bactérias crescem em meios de laboratório, 2- Culturas puras: formadas por uma população derivada de uma única célula original, 3- Culturas mistas: mais de um tipo de população bacteriana no mesmo meio de cultura. Métodos de conservação de uma cultura pura:1- Transferência periódica para meios novos: meio, temperatura e tempo2- Conservação de culturas sob camada de óleo mineral 3- Liofilização: conservação pela dessecação rápida em estado de congelamento. É a mais eficaz, as culturas permanecem inalteradas por mais de 20 anos.4- Estocagem em baixa temperatura: nitrogênio líquido (-196°C). As células são congeladas com um agente protetor (glicerol). Características culturais: cor, odor e quantidade crescimento 1- Colônia em placa de ágar: - Tamanho: varia de dimensões, muito pequenas (puntiformes) até colônias muito grandes (10mm de comprimento) - Bordas: circular ou irregulares - Elevação: achatadas (muito finas) ou elevadas (espessas) - Pigmentação: coradas (pigmentadas) ou não - Detalhes ópticos: opacas, translúcidas ou opalescentes. 2- Crescimento em Caldo nutritivo: Quantidade do crescimento: escasso, moderado, abundante, Distribuição do crescimento: uniformemente distribuído: turvo Confinado a superfície: película Acumulado: granuloso ou viscoso, Odor: Pútrido, aromático (ou de frutas), desprezível.

Mycoplasmas pleuro-pneumonia-like organisms (PPLOs ): Os micoplasmas, denominação comum dos gêneros Mycoplasma e Ureaplasma, representam um grupo único e complexo de microrganismos que tem sido ignorado pela maioria dos laboratórios de diagnóstico. Baixo crescimento, Fastidioso, Falta de meios comerciais e ausência de procedimentos para um diagnóstico rápido, Devido a uma percepção clínica. Medem cerca de 0,15 ìm - 0,3 ìm, Os microbiologistas ainda discutem se as bactérias evoluíram dos micoplasmas primitivos, ou se trata de estirpes separadas, Os micoplasmas evoluíram a partir de vírus. Forma variada: cocobacilo, anel,glóbulos e pequenos elementos, Imóveis, Coram mal pelo Gram (gram negativos), Coram-se pelo Giensa, Aeróbios, anaeróbios facultativos, Necessitam colesterol para crescimento. A diferença principal entre as bactérias e os micoplasmas é que as bactérias possuem parede celular sólida, Os micoplasmas possuem apenas uma membrana flexível, o que se junta ao tamanho para dificultar a sua identificação, mesmo quando observados ao microscópio eletrônico. Os micoplasmas não são sensíveis as penicilinas, Antibióticos com tetraciclinas (sensibilidade), Presença de estirpes que exibiam um crescimento com micélios, semelhante ao dos fungos, o que levou ao aparecimento da designação micoplasma. HABITAT: Comensais de mucosas respiratória, digestório e urogenital (animais e humanos), Contaminantes em culturas de tecidos, Dejetos (esgoto - saprófitos), Articulações e glândulas mamárias dos animais. INFECÇÃO: Contato entre animais e ovo. CULTIVO: Meios PPLO sólido e líquido, Inocula-se em meio líquido e apó 3 - 7 diasest é inoculado em meio sólido, Temp - 37C - 7 dias, Algumas amostras - jarra com vela, As colônias aparência de ovo frito. MATERIAL DIAGNÓSTICO: Leite, Swabs, Tecidos (cornetos nasais ou articulaçoes) Diagnóstico imunofluorescência, ELISA. BIOQUÍMICA: Fermentam glicose, Hidrolisam arginina, Hemólise. Os micoplasmas podem viver dentro de células , sem matar a célula hospedeira, como fazem alguns vírus e bactérias, mas também podem viver e crescer fora das células, nos fluídos corporais. São responsáveis por doenças como a artrite reumatóide, inflamações alérgicas, pneumonia atípica e outras doenças; Acredita-se uma possível ligação entre estes organismos e certas doenças relacionadas com o sistema imunitário, como diabetes e esclerose múltipla. RESISTENCIA: Conservantes -70C em nitrogênio liquido, Liofilização, Resistentes a penicilina. PATOGENIA: M. hyopneumoniae - pneumonia em suínos, M. hyorhinis - poliartrite em leitões, M. mycoides - pleuropneumonia em bovinos, M. pneumoniae - pneumonia em humanos, M. gallisepticum - sinusite infecciosa em perús, doença respiratória crônica em galinhas e perus, M. synoviae - sinusite infecciosa de galinhas e perús.